rtStar™ tRF&tiRNA Pretreatment Kit & First-Strand cDNA Synthesis Kit

  • 產品簡介
  • 產品設計背景
  • 實驗流程
  • 說明書
  •       rtStar™ tRF&tiRNA預處理試劑盒用於qPCR的cDNA合成之前的tRF & tiRNA樣品製備。該試劑盒通過去除tRF和tiRNA片段中經常存在的3’環磷酸和5’羥基,產生了可以連接接頭的3’羥基和5’磷酸末端。tRF和tiRNA片段內部的 m1A、m1G 和 m3C修飾也被去甲基化以實現高效的 cDNA 逆轉錄。 

         rtStar™ tRF&tiRNA第一鏈cDNA合成試劑盒將預處理的 tRF 和 tiRNA 片段轉化為用於 qPCR 反應的 cDNA。 該方法依次將 3'-Adaptor 連接到 RNA 的 3'-末端,將 5'-Adaptor 連接到 RNA 的 5'-末端。

    產品優勢

    •有效去除內部修飾以確保 cDNA 合成過程中逆轉錄酶的順利進行,解除修飾對常規cDNA合成的影響

    •進行末端修複,以保證產生適合連接接頭的3’羥基和5’磷酸末端

    •有效區分tRF&tiRNAs和其前體

    •與未處理的樣本相比,預處理極大地增加了tRF&tiRNA檢測的靈敏度、定量精確性和檢出區分度


    產品名稱 貨號 規格 產品描述
    rtStar™ tRF&tiRNA Pretreatment Ki AS-FS-005 12 Reactions 3’氨酰基末端去除 3‘環磷酸末端去除 5’羥基末端磷酸化 m1Am1Gm3C去甲基化
    rtStar™ tRF&tiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit AS-FS-003 6  Reactions 依次將 3'-Adaptor 連接到 RNA 的 3'-末端,將 5'-Adaptor 連接到 RNA 的 5'-末端
    rtStar™ tRF&tiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit AS-FS-003-02 12 Reactions 依次將 3'-Adaptor 連接到 RNA 的 3'-末端,將 5'-Adaptor 連接到 RNA 的 5'-末端
  •        tRFs&tRF&tiRNA是一類由tRNA發生精確切割而產生的非編碼小RNA分子,近來研究表明,這類小RNA分子具有多種生物學功能,比如類似於microRNA參與RNA幹擾;調節靶向mRNA的穩定性;在細胞應激條件下促進應激顆粒(SG)的組裝;以及調控細胞凋亡等。此外,tRFs&tiRNAs還與癌症、神經退行性疾病等多種疾病緊密關聯。 然而,tRF&tiRNAs 的分子特性對其精確的表達定量造成了挑戰。 由於其獨特的前體與切割方式,tRF&tiRNAs攜帶有多種內部或末端修飾。tRF和tiRNA可能保留了來源的tRNA上的甲基化修飾(m1A、m1G和m3C等)和氨酰基末端,tiRNAs常由RNA內切酶Angiogenin切割產生,這類內切酶會在切割位點產生5‘羥基(5’-OH)末端與3’環磷酸(3‘-cP)末端。許多當前標準的cDNA文庫構建方法,特別是針對小非編碼RNA的方法,包含了將3’和5’寡核苷酸接頭連接到RNA的3’和5’末端的接頭連接步驟,需要底物小RNA 5’端為磷酸,3‘端為羥基。此外,tRFs&tiRNAs的內部修飾比如m1A, m1G與m3C會嚴重阻礙反轉錄過程。為了準確檢測tRFs&tiRNAs,這些修飾必須被有效的去除。


    圖1. tRF&tiRNA的常見修飾可以幹擾接頭連接和cDNA合成,從而顯著降低cDNA文庫構建的質量

           此外,tRF&tiRNAs 是通過精確的生物發生過程從 tRNA 或 pre-tRNA 產生的。 傳統的 qPCR 很難將 tRF&tiRNA 與其前體(tRNA 或 pre-tRNA)區分開來,因為它們共享相同的序列。 為了實現 tRFs&tiRNAs 的高保真和準確定量,Arraystar 開發了一個優化的檢測係統,由兩個產品組成:rtStar™ tRF&tiRNA Pretreatment Kit 和 rtStar™ tRF&tiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit。 預處理試劑盒旨在去除 tRF和tiRNA的內部和末端修飾。 通過在 tRF&tiRNA 的 3' 和 5' 端引入兩個人工序列,第一鏈cDNA試劑盒可以有效地將 tRF&tiRNA 與其前體和其他小 RNA 區分開來。



  • Aksomics使用Arraystar的試劑為客戶提供服務,以下為相關資料:

    產品說明書:  adobe_pdf_small Manual_tRF&tiRNA Pretreatment Kit_v2.01

                          adobe_pdf_small Manual_rtStar™_First-Strand_cDNA_Synthesis_Kit_Manual_(3_and_5_adaptor)(12_reactions)_v1.02

                          adobe_pdf_small Manual_rtStar_First-Strand_cDNA_Synthesis_Kit_Manual_(3_and_5_adaptor)(6_reactions)_v1.08